[目的]构建科学合理的生态安全格局是划定“三区三线”和落实生态文明战略的基础手段。[方法]基于生物多样性、水资源安全、地质灾害规避对生态用地重要性进行定量评价，进而识别生态源地；顾及PM2.5浓度、夜间灯光数据对物种迁徙的影响构建修正后的生态阻力面；通过最小累计阻力模型构建区域生态安全格局。[结果]南京市生态源地面积490.3 km2，基本涵盖国家级和省级自然保护地，识别结果较为合理。修正后生态阻力面的阻力值范围在0-43854.6之间，阻力值较大的区域位于鼓楼区、秦淮区、建邺区东部等长江南岸，浦口区中部、玄武区中部、江宁区东北部等区域阻力较小，能够较好地表征区域生态过程差异，以此构建的南京市“一带三区多轴”的生态安全格局框架与现有《南京市主体功能区实施规划》更加契合。 [结论] 改进后的生态安全格局构建方法行之有效。